Клебсиелла окситока у грудничка в кале: Клебсиелла у грудничка в кале

Клебсиелла относится к условно-патогенным бактериям и именно ее зачастую считают «виновницей» развития дисбактериоза у малышей. Она действительно очень устойчива к окружающей среде, может сохраняться долгое время, как на предметах, так и на теле человека и погибает лишь спустя 30 минут при температуре 65 градусов. Что делать, чтобы помочь малышу справиться с инфекцией?

В наши дни все чаще у грудничков встречаются инфекционные заболевания, вызываемые патогенными микроорганизмами. Одними из них являются палочки Фридлендера, провоцирующие появление клебсиеллы. Несмотря на то, что эти палочки считаются достаточно безобидными и могут находиться повсюду, стремительное увеличение их количества имеет самые неожиданные последствия. В чем же причины их размножения клебсиеллы, какие симптомы можно наблюдать при данном заболевании и есть ли необходимость в его лечении, рассмотрим подробнее в данной статье.

Практически каждый родитель боится в результатах анализов на дисбактериоз увидеть это страшное слово – «клебсиелла». Однако данную бактерию можно встретить практически у всех, так как она является одной из множества бактерий, живущих в организме человека, никак себя не проявляя. Но такое «затишье» длится лишь до тех пор, пока в организме сохраняется оптимальная микрофлора. Если же количество «хороших» бактерий по каким-то причинам резко уменьшается, то патогенные бактерии, к которым относится клебсиелла, становится опасными.

Активизироваться клебсиелла начинает не спонтанно. На это ее могут спровоцировать несколько причин:

• Ослабление иммунитета
• Несоблюдение гигиенических условий
• Неочищенная вода и продукты питания
• Контакт с носителем инфекции

Важно помнить, что в основном патогенные микроорганизмы проникают в ткани новорожденного через мать в процессе родов или после них. Но так же существуют и другие штаммы, проникающие в организм крохи через пыль, еду, воду и шерсть животных.

Интересно, что по данным исследований ВОЗ, клебсиелла является потенциальным кандидатом на роль супербактерий, то есть бактерий, устойчивых к антибиотикам. А это значит, что они представляют собой угрозу для существования людей как вида в целом.

Для формирования супербактерий достаточно двух причин

Не до конца вылеченные инфекции. Зачастую после начала приема антибиотиков, пациенту становится значительно легче и он преждевременно прекращает прием назначенных медикаментов или же врач просчитывается с назначаемым курсом лечения, что так же может повлиять на развитие супербактерий.

Использование антибиотиков в большом количестве. Организм человека со многими инфекциями, включая и кишечные сбои, способен справиться самостоятельно. А злоупотребление антибиотиками крайне негативно сказывается на организме человека, так как применение таких сильных медикаментов приводит к тому, что бактерии адаптируются к ним, а значит, перестают на них реагировать.

Так как клебсиелла считается одной из самых распространенных больничных инфекций, она автоматически становится очень опасной, так как в больницах систематически применяются антибиотики. Это чревато тем, что в любой больнице может сформироваться очень устойчивый штамм, а пациенты этой клиники автоматически станут носителями данной супербактерии.

Чаще всего клебсиелла поражает кишечник новорожденного и больше этому подвержены ослабленные и недоношенные малыши. У грудничков клебсиеллез практически всегда протекает достаточно в тяжелой форме. Опасность данного заболевания состоит в том, что ее симптоматику очень легко перепутать с другими воспалительными процессами желудочно-кишечного тракта, такими как:

• повышение температуры тела до 37-39 градусов
• частое срыгивание или рвота, иногда это достигает 6-8 раз в сутки
• очень частый и обильный жидкий стул до 20 раз в сутки
• может присутствовать примесь крови в кале новорожденного
• присутствует сероватый оттенок кожных покровов младенца
• болезненность в области живота, вследствие чего малыш становится капризным
• присутствует вялость и заторможенность
• отсутствует аппетит

Инфекции, вызванные клебсиеллой, длятся дольше остальных кишечных инфекций, чем и отличаются от других подобных заболеваний. В связи с сильным обезвоживанием организма грудничка возникает угроза его жизни! Именно поэтому не стоит заниматься самолечением и при любой кишечной инфекции необходимо своевременно проконсультироваться с лечащим врачом.

Клебсиеллу возможно обнаружить лишь с помощью лабораторных исследований. Для этого у пациента берут часть каловых или рвотных масс, мазки из носа, анализ крови, в котором могут произойти некоторые изменения.
Анализ кала на дисбактериоз может быть непоказательным, поэтому в странах с хорошо развитой медициной данный анализ считается бесполезным и не применяется в таких случаях.

Причины, при которых необходимо лечить клебсиеллез:

• превышенное количество бактерии в кале
• угнетенное самочувствие ребенка

Если же у ребенка наблюдается хороший аппетит, и он не теряет вес, а набирает его по норме, то лечить клебсиеллез нет необходимости.

В чем заключается лечение клебсиеллеза?

Применение лечения с помощью антибиотиков при таком заболевании как клебсиеллез применяется крайне редко, только лишь в тяжелых случаях. Основная методика лечения при более легкой форме заболевания заключается в гидратации, то есть в восполнении жидкости в организме. Зачастую родители не могут справиться с данной проблемой, поэтому им предлагается госпитализация в клинику.

Существует несколько рекомендаций для профилактики клебсиеллеза:

• кормить ребенка необходимо только тогда, когда он голоден, так как печень играет немаловажную роль в поддержании иммунной системы человека, а значит, она не должна быть перегружена

• в рацион маленького ребенка или его мамы (при грудном вскармливании) обязательно должно входить большое количество овощей, фруктов, зелени и круп

• использовать антибиотики в самых крайних случаях, только тогда, когда без них действительно невозможно обойтись.

Нашей девочке 4,5 месяца. Мы полностью на ГВ. За все это время стул ребенка нестабилен: в основном жидкий с непереваренными комочками, иногда просто водой, очень часто сплошная слизистая тягучая масса зеленого цвета. Кроме того, что всегда после кормления долго остается надутая, как шарик, и мучается пуками, но без капризов- нас ничего не беспокоит. Решили сдать анализ на дисбактериоз. У мамы в молоке в одной груди обнаружили Стафилококк epidermikus c не очень мне понятной припиской «немассивная обсемененная». Кал ребенка, картина такая: Патогенной флоры — не обнаружено. E.coli с нормальной ферментной активностью – 15*10 в 10 E.coli со сниженной ферментной активностью – 0 E.coli гемолитические- 0 Золотистый стафилококк- 4* 10 во 2 Бифидо

13 Дек Нашей девочке 4,5 месяца. Мы полностью на ГВ. За все это время стул ребенка нестабилен: в основном жидкий с непереваренными комочками, иногда просто водой, очень часто сплошная слизистая тягучая масса зеленого цвета. Кроме того, что всегда после кормления долго остается надутая, как шарик, и мучается пуками, но без капризов- нас ничего не беспокоит. Решили сдать анализ на дисбактериоз. У мамы в молоке в одной груди обнаружили Стафилококк epidermikus c не очень мне понятной припиской «немассивная обсемененная». Кал ребенка, картина такая: Патогенной флоры – не обнаружено. E.coli с нормальной ферментной активностью – 15*10 в 10 E.coli со сниженной ферментной активностью – 0 E.coli гемолитические- 0 Золотистый стафилококк- 4* 10 во 2 Бифидо- 10в 9 Лакто – 10 в 8 Клебсиелла – 3* 10 в7. Нужно ли лечиться маме и как лечить ребенка, не прибегая к антибиотикам, по более щадящей , но надежной схеме. Нужно ли вообще лечить ребенка с такими анализами и беспокойным стулом? Будем очень благодарны за консультацию

У Вашего ребёнка дисбиоз кишечника, аэробно-анаэробный, декомпенсированный. Лечение требуют два микроба:

–         Стафилококк золотистый ( Staphylococcus aureus) — факультативный и наиболее частый возбудитель стафилококкоза, частый представитель микрофлоры носа и кожи

Стафилококк золотистый способен вызывать целую вереницу болезней, от минорных заболеваний кожи, таких как прыщи, папулы, пиодермия, фурункулы, целлюлит, гиподермит, жировая гранулема, карбункулы и т.д.Под его влияние попадают многие органы: кожа, мягкие ткани, кости, суставы; вызывает инфекции в ранах. Как и прежде относится к числу пяти наиболее частых причин нозокомиальных (больничных) инфекций, часто является причиной постоперационных ран (нагноений).

–         Клебсиелла ( Klebsiella) — условно-патогенная бактерия.

Представители рода встречаются в фекалиях человека, на коже и слизистых дыхательных путей, в почве, воде, фруктах и овощах. Благодаря капсуле устойчивы в окружающей среде. Бактерии этого рода Вызывают пневмонию, урогенитальные инфекции, в том числе у новорожденных, у ослабленных и пожилых лиц, конъюнктивиты, менингиты, сепсис, острые кишечные инфекции. Klebsiella pneumoniae subsp. ozaenae и Klebsiella pneumoniae subsp. rhinoscleromatis вызывают соответственно озену и риносклерому (гранулематозное поражение слизистой оболочки верхних дыхательных путей).

Для лечения дисбиоза кишечника Вам необходимо обратиться к педиатру по месту жительства или вызвать врача из «Доброго Доктора» по телефону 8029-333-88-77 ежедневно с 9.00 до 19.00.

Эпидермальный стафилококк, который был обнаружен у мамы, в лечении не нуждается.

Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition

Введение: МИК часто диагностируется клинически у младенцев, когда они проявляются ректальным кровотечением, диареей и различной степенью боли. Они реагируют на изменение протеина в смеси или полное исключение протеина молока из рациона матери у младенцев, вскармливаемых грудью. Посев кала часто не проводится, потому что считается, что в этой возрастной группе инфекции встречаются нечасто. Эндоскопия, биопсия и диетические проблемы обычно не выполняются.Недавно Y. Davies и др. Представили ребенка старшего возраста с хронической диареей, вздутием живота и болями в животе. (VSL # 3 сателлитный симпозиум NASPGHAN на встрече в Монреале, 22 октября 2003 г.) Было показано, что у патента кишечная инфекция, вызванная токсигенным штаммом Ко. Ко выращивали из стула. Токсин был продемонстрирован. Пациент ответил на терапию пробиотиками. Здесь мы сообщаем о двух младенцах, у которых наблюдалась явная МИК, и в культуре их стула росло Ко.

Методы: Все культуры стула из практики автора (BB), проведенной за последние 3 года, были проанализированы, и два были признаны положительными на Ко.Краткое описание клинических случаев: 1. L.A., доношенный продукт нормальной беременности и делевери, представленный в возрасте 4 недель с сильными болями во время кормления, раздражительностью и гнойным газом с различной реакцией на выведение молочного белка из рациона матери и консервативным лечением. Через 3 недели у него развился сильный понос со спазмами с кровяными пятнами и слизью. Подозревали колит, вызванный молоком; стул с / х рос Ко. 2. О. доношенный продукт нормальной беременности и родов, представленный 3-месячным анамнезом перемежающегося ректального кровотечения, начавшегося в 10-недельном возрасте, с очевидной временной реакцией на устранение молочного белка из рациона матери, а затем устранение соевого белка.Стул стал более кровавым от слизи. Табурет с / х рос Ко.

Результаты: Ко обычно считается сапрофитом кишечника. В редких случаях считается, что он вызывает диарею или колит, вызванную приемом антибиотиков. Показано, что клинически изолированные штаммы Ко продуцируют низкомолекулярный цитотоксин, который вызывает геморрагический колит на модели подвздошной петли кролика и цитотоксические изменения в культурах клеток.

Заключение: Насколько нам известно, это первый отчет об ассоциации Ко с очевидным MIC.Эпидемиологические и проспективные клинические исследования с соответствующими бактериологическими исследованиями и исследованиями токсинов необходимы для дальнейшего определения их роли в МПК, и они планируются. Посев кала следует рассматривать в МПК и должен включать посев на все потенциальные и редкие патогены из-за относительно подавленного иммунного состояния новорожденного.

Ссылка (S): нет

Количественное и качественное исследование кишечной флоры новорожденных

J Glob Infect Dis.2012 октябрь-декабрь; 4 (4): 188–192.

Нидхи Шарма

Отдел микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

Рама Чаудхри

Отдел микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

Пинаки Паниграхи

¹ Департамент эпидемиологии и педиатрии, Центр глобального здоровья и развития, Колледж общественного здравоохранения, Медицинский центр Университета Небраски, Омаха, штат Нью-Йорк, США

Департамент микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

¹ Департамент эпидемиологии и педиатрии, Центр глобального здоровья и развития, Колледж общественного здравоохранения, Медицинский центр Университета Небраски, Омаха, штат Нью-Йорк, США

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями Creative Commons Attribution-Nonco. mmercial-Share Alike 3.0 Unported, что разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Abstract

Предпосылки:

В неонатальном периоде развивающаяся функция кишечного барьера обеспечивает неоптимальную защиту слизистой оболочки от инфекции. Установление нормальной комменсальной микрофлоры играет жизненно важную роль в этом процессе.

Цели:

Определить аэробные и анаэробные бактерии количественными и качественными методами в образцах фекалий новорожденных.

Условия и дизайн:

Проспективное исследование было проведено в двух группах в больнице третичного уровня: в группе А были недоношенные дети и в группе В — доношенные дети.

Материалы и методы:

В исследование были включены 62 недоношенных ребенка с массой тела <1500 г и гестационным возрастом <34 недель и 29 доношенных новорожденных в возрасте 4 недель. Количественное определение бактериальной нагрузки проводили с помощью десятикратных серийных разведений на соответствующих средах.

Статистический анализ:

Данные были проанализированы с помощью EPIINFO-Ver 6.04.

Результаты и выводы:

Преобладающей аэробной бактерией была Klebsiella pneumoniae . У недоношенных младенцев аэробные бактерии были колонизированы в среднем 2,1 и анаэробными бактериями 0,1. Количественный анализ показал, что количество бактериальных колоний в фекалиях находится в диапазоне 10 ⁴ -10 ¹³ КОЕ / г. Грамотрицательные и грамположительные бактерии постепенно увеличивались с интервалом от 2 до 3 недель. Среднее значение log КОЕ грамотрицательных бактерий и грамположительных бактерий было статистически незначимым с 3 по 14 день ( P > 0.05). На 21 день наблюдалось значительное изменение колонизации обоих бактериальных sp ( P <0,05). Потенциальные патогенные аэробные бактерии преобладают в кишечной флоре недоношенных детей, находящихся на вскармливании в неонатальном отделении. Необходимо изучить меры по устранению этого дисбаланса в микроэкологии кишечника недоношенных детей.

Ключевые слова: Бактериальная флора, фекалии, кишечник, новорожденные, количественное определение

ВВЕДЕНИЕ

В неонатальный период формирование нормальной комменсальной микрофлоры играет важную роль в развитии защиты слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.Сообщалось, что бактериальная флора недоношенных детей в отделении интенсивной терапии новорожденных (ОИТН) отличается от здоровых доношенных детей. [1,2] У здоровых желудочно-кишечный тракт доношенных новорожденных был колонизирован разнообразной микрофлорой. в течение 10 дней жизни, тогда как у недоношенных детей микрофлора не получает возможности для колонизации. У младенцев с низкой массой тела при рождении это важный фактор риска неонатальной смертности и заболеваемости, включая сепсис и желудочно-кишечные расстройства.[3,4] Большинство этих младенцев обычно получают лечение антибиотиками широкого спектра действия в условиях интенсивной терапии интенсивной терапии вскоре после рождения. Таким образом, бактериальная флора этих младенцев характеризуется отложенной колонизацией желудочно-кишечного тракта ограниченным количеством бактерий. [5] Однако имеется ограниченная литература, касающаяся микробной флоры у недоношенных детей, особенно у детей с низкой массой тела при рождении (<1500 г), которые предрасположены к различным инфекционным и желудочно-кишечным осложнениям, таким как некротический энтероколит (НЭК).Таким образом, это исследование было проведено с целью определения фекальной микрофлоры у недоношенных детей, поступивших в отделение интенсивной терапии стационара третичного уровня, чтобы оценить риск развития желудочно-кишечных осложнений у этих детей.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Проспективное исследование (Фаза-I) было проведено в двух группах во Всеиндийском институте медицинских наук, Нью-Дели, Индия, после того, как оно было одобрено с этической точки зрения. В группу А вошли шестьдесят два недоношенных ребенка с массой тела <1500 г и сроком беременности <34 недель.Из 62 случаев было проведено количественное определение 34 образцов стула и качественный анализ фекальной бактериальной флоры в 28. Образцы были собраны на 3, 7, 14, 21 день (все ± 2 дня) у 34 детей. В группе Б обследовано 29 доношенных новорожденных. Образцы кала были качественно проанализированы.

Один грамм образца стула переносили во флакон со стеклянными шариками (SIGMA Chemicals Co., США), содержащий 1 мл стерильного физиологического раствора, и встряхивали. Готовили десятикратные серийные разведения (10 ² -10 ⁹ ) и 10 мкл каждого разведения культивировали на 5% овечьей крови и агаре МакКонки (Difco Chemicals) для аэробных бактерий.Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 48 часов и исследовали через 24 часа и 48 часов. Бактерии были идентифицированы с помощью обычных биохимических тестов, а также с помощью системы API, то есть теста API 20 E, API staph / strep (bioMerieux Vitek Inc.) для различных грамположительных и отрицательных организмов. Для анаэробного культивирования образцы стула высевали на агар для инфузии сердца Brain (Hi-Media Laboratories, Pvt. Ltd. India) с добавлением гемина (Hi-Media Laboratories, Pvt. Ltd. India) и Vit K (Hi-Media Laboratories, Pvt.Ltd. India) и инкубировали в анаэробных условиях при 37 ° C в течение от 48 часов до 72 часов. Анаэробные бактерии были идентифицированы обычными биохимическими методами и системой RapID ANA (Innovative Diagnostic System Inc Norcross, GA).

Общее количество бактерий на грамм стула сообщалось в каждом образце количественного исследования.

Статистика

Подсчет колоний организмов выражали как log ₁₀ подсчет. Для статистических сравнений использовали средний логарифм КОЕ. Данные были проанализированы с помощью EPIINFO-Ver 6.04. Статистический метод для непрерывных переменных использовался с применением t-критерия или критерия Манна-Уитни (где применимо), а для категориальных переменных использовались хи-квадрат или точный критерий Фишера (для сравнения количества колонизированных младенцев). Значимость наблюдалась, если P <0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Всего в это исследование был включен 91 ребенок для определения структуры кишечной флоры новорожденных.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Общее количество колоний аэробных бактерий колебалось от 10 ⁴ до 10 ¹³ КОЕ / г.Показатели колонизации наиболее часто выделяемых бактерий приведены в. Характер колонизации изменялся через разные промежутки времени в конце сбора образцов (d21). Количество фекальных бактерий, как грамотрицательных, так и грамположительных, постепенно увеличивалось в течение 2–3 недель. Некоторые образцы нельзя было собрать в определенный промежуток времени, потому что у младенцев не было стула.

Таблица 1

Общее количество бактериальных изолятов у недоношенных детей (Группа A)

Колонизация грамотрицательных организмов увеличивалась с 1 по 21 день во время пребывания в отделении интенсивной терапии.Наблюдалось последовательное увеличение общего числа видов бактерий и значительные изменения в структуре колонизации отдельными видами бактерий с течением времени. К концу первого месяца жизни значительный процент детского стула был заселен Klebsiella pneumoniae ; 17,8% на 3 день, 50% на 7 день, 61% на 14 день, 60% на 21 день ( P <0,05) и E. coli ; 35% на 3-й день, 40% на 7-й день, 38% на 14-й день и 60% на 21-й день. Среднее log КОЕ грамотрицательных бактерий и грамположительных бактерий было статистически незначимым с 3-го по 14-й день ( P > 0). .05). На 21 день наблюдалось значительное изменение колонизации обоих бактериальных sp ( P <0,05) []. Salmonella senftenberg, Salmonella typhi, Salmonella gallinarum, Klebsiella oxytoca были обнаружены только у младенцев с клиническим анамнезом НЭК.

Таблица 2

Среднее значение log КОЕ у младенцев <1500 г

КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Колонизированными грамотрицательными и положительными аэробными организмами были Klebsiella pneumoniae 41,3%, Escherichia coli 24.1%, Proteus sp 10,3%, Enterococcus faecium 34,4%, Staphylococcus epidermidis 6,8% и Micrococcus sp 3,4% [] и колонизация анаэробных организмов составила Bifidobacterium sp (13,4%) и Clostridium biferment (3,4%). Наблюдалась статистически значимая разница в росте грамположительных организмов в обеих группах ( P <0,05), которая оказалась низкой у недоношенных детей. Рост защитных организмов (полезных бактерий) был статистически незначимым ( P > 0.05) в обеих группах.

Таблица 3

Общее количество видов бактерий у недоношенных и доношенных детей

ОБСУЖДЕНИЕ

Характер бактериальной колонизации в кишечнике новорожденных зависит от различных факторов; гестационный возраст, способ родоразрешения, тип кормления, бактериальные взаимодействия, антимикробная терапия и другие факторы окружающей среды. Сообщалось, что колонизация микрофлоры у детей, вскармливаемых грудью, отличается от кормления молочными смесями. [4,5] Некоторые авторы обнаружили, что фекальная микрофлора у детей, вскармливаемых грудью и детей, вскармливаемых смесью, по существу одинакова; другие показали, что Bifidobacteria являются преобладающей флорой в фекалиях младенцев, вскармливаемых грудью.[6,7] Эти исследования были сосредоточены на доношенных детях и показали, что желудочно-кишечный тракт здоровых доношенных новорожденных колонизирован различными типами аэробных и анаэробных микробных организмов. [8,9]

Iseki K изучал развитие фекальной флоры, как аэробные, так и анаэробные при введении различных кормовых смесей, и наблюдали, как в кишечнике новорожденных сначала колонизировались представители Enterobacteriaceae в первый день жизни, которое постепенно уменьшается на 6 ^{-й день} , за которым следует Bifidobacteria , которое увеличивалось через 2-3 дня после приема пищи. жизнь грудного вскармливания младенцев.Однако количество других бактерий (энтеробактерий) было больше у детей, вскармливаемых из бутылочки, чем у детей, вскармливаемых грудью. Эти результаты свидетельствуют о том, что грудное вскармливание защищает незрелый кишечник от системных инфекций. [10] Ира HG и др. . сообщили, что популяция грамположительных бактерий была выше, чем грамотрицательных бактерий у детей с низкой массой тела при рождении, а характер бактериальной колонизации был аналогичен как у детей, вскармливаемых грудным молоком, так и у детей, вскармливаемых молочной смесью, в условиях США. Они выделили Lactobacillus sp.и Bifidobacterium sp. только у одного младенца, находящегося на грудном вскармливании. [11] В другом исследовании было замечено, что представители Enterobacteriaceae, Enterococcus sp. и Staphylococcus sp. были колонизированы в течение 7 ^-го -го дня жизни без антибактериальной терапии доношенных новорожденных. В исследовании, проведенном Стивенсом Д.К. и сотрудниками, 20 младенцев, которых кормили молочными смесями из хранимых смесей и патентованными смесями на второй неделе жизни среди госпитализированных недоношенных детей, продемонстрировали картину кишечной флоры, отличную от нормальных доношенных детей, что может привести к внутрибольничному сепсису и увеличению заболеваемости системных и локализованных инфекций.Доказано, что использование замороженного грудного молока для подавления колиформных и других потенциально патогенных организмов неэффективно у этих госпитализированных недоношенных новорожденных, особенно тех, которые лечились антибиотиками широкого спектра действия. [12,13] Настоящее исследование было запланировано для определения различных аэробная и анаэробная фекальная бактериальная флора недоношенных детей (<1500 г) в условиях интенсивной терапии интенсивной терапии. В нашем исследовании большинство младенцев были колонизированы 2-3 видами бактерий в обеих группах, преобладающими видами были Klebsiella pneumoniae и E.coli . Уровень колонизации грамотрицательных бактерий был высоким как у недоношенных, так и у доношенных детей, тогда как количество грамположительных бактерий было меньше у недоношенных. Бактериальная колонизация недоношенного кишечника, вероятно, играет роль в патогенезе и предрасположенности к желудочно-кишечным осложнениям, таким как некротический энтероколит (НЭК). Вестра-Мейер и др. . исследовали аэробную и анаэробную фекальную флору при некротическом энтероколите новорожденных, чтобы установить связь между колонизацией конкретной бактериальной флорой и развитием NEC, и сообщили, что уровень выделения грамположительных кокков (GPC) был выше, чем грамотрицательных бацилл (GNB).Обычно выделяемыми аэробными бактериями были Staphylococcus epidermidis (61%), Enterococcus sp. (56%), Klebsiella sp. (37%) и E.coli (29%), а анаэробными организмами были Clostridium sp (61%) и Bacteroides sp (20%). В их исследовании аэробные и анаэробные виды бактерий колонизировали в среднем 2,1 и 0,8 на грамм стула соответственно. Они предположили, что не было значительной разницы в характере колонизации бактерий между исследуемой и контрольной группами.Важным отличием было то, что колонизация Klebsiella sp была выше у тех детей, у которых в анамнезе был диагностирован НЭК [14], тогда как в текущем исследовании Salmonella senftenberg, E.coli, Salmonella typhi, Salmonella gallinarum и Klebsiella oxytoca выращивали у детей с диагнозом NEC. Было высказано предположение, что патогенная кишечная флора может играть роль в предрасположенности новорожденных к внутрибольничному сепсису и НЭК [15,16] Hoy et al .сообщили, что снижение количества некоторых видов бактерий в фекальной флоре из-за изменения pH после бактериальной ферментации в тонком кишечнике изменяет внутрипросветные условия и предшествует клиническому началу НЭК [17].

Холл и др. . обнаружили дефицит Lactobacilli по сравнению с бактериями формы кишечной палочки у недоношенных детей, которые находились на лечении в отделении интенсивной терапии, и высокое количество Lactobacillus у доношенных детей к 30-дневному возрасту. Это исследование указывает на недостаток полезной флоры у недоношенных детей.[18] Аэробные и анаэробные виды бактерий у недоношенных новорожденных с НЭК или без них были колонизированы в среднем на 2,1 и 0,1 на грамм стула соответственно. В настоящем исследовании Lactobacillus sp. был выделен только в одном образце стула на 7-14 день, тогда как у доношенных новорожденных Bifidobacterium sp были выделены у 4/29 (13,7%), в отличие от Rubatelli et al . из Италии, который сообщил о высокой распространенности Bifidobacterium sp. (47,6%) у детей, вскармливаемых грудью, и Klessen et al .у 89% детей, вскармливаемых грудью, на 7 ^-й -й день жизни, которая увеличилась до 95% к 30 ^-й -й день, Lactobacilli были выделены в 12/19 (63%) проб стула на 7 ^{-й день.} дня и увеличилась до 80-85% в течение двух месяцев. [19,20] Однако удивительно, что в настоящем исследовании Lactobacilli не были выделены ни в одном образце стула грудных младенцев за период 1 -2 месяца. Также выделение Bifidobacterium sp.число доношенных детей было низким по сравнению с вышеупомянутым исследованием. В связи с нашим открытием, необходимо рассмотреть важный вопрос: лучше ли колонизируются дети, вскармливаемые грудью, анаэробами в нашей стране? Большинство недоношенных детей в отделении интенсивной терапии получали антибиотики широкого спектра действия и частично или полностью кормились сцеженным грудным молоком, что может быть фактором, ограничивающим бактериальную колонизацию в кишечнике. Необходимо изучить меры, которые «нормализуют» микробную экологию кишечника. У здоровых доношенных детей грудное молоко способствует колонизации Bifidobacterium и Lactobacillus sp.[21] Показания к грудному вскармливанию просто на основании того, что они помогают нормальному развитию кишечной флоры, для борьбы с кишечной инфекцией, должны быть пересмотрены. Циркулирующее микробное давление в окружающей среде в развивающихся странах, таких как Индия, может препятствовать колонизации анаэробными неспорообразующими грамположительными бациллами, такими как Bifidobacterium , а также Lactobacillus . В нашем предыдущем исследовании мы обнаружили умеренную степень колонизации Lactobacilli у более крупных недоношенных детей (> 1500 г), которых кормили пробиотиком Lactobacillus rahmnosus . ГГ .В последние годы несколько исследований, включая наше исследование, показали, что многие препараты Lactobacillus могут колонизировать кишечник недоношенных новорожденных и изменять кишечную флору, но приводит ли такая колонизация к клинически значимому улучшению, еще предстоит изучить [22, 23]

Представленные здесь данные основаны на микробиологической изоляции в обычных аэробных и анаэробных средах. Недавние отчеты предполагают, что молекулярные инструменты, основанные на сходстве последовательностей 16 S рДНК, такие как флуоресцентная гибридизация in-situ (FISH) и денатурирующий градиентный гель-электрофорез (DGGE), помогли преодолеть ограничения традиционных методов микробиологической культуры при изучении состава фекальной микрофлоры.Эти инструменты успешно применялись для изучения развития детской микрофлоры, изменений микрофлоры человека в процессе старения, воздействия пребиотиков и пробиотиков на состав микрофлоры человека, а также влияния диетических вмешательств на микрофлору кишечника [24]. ]

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Мы пришли к выводу, что специфическая микробная экология модели колонизации и отсутствие защитных грамположительных анаэробных бактерий, особенно Bifidobacterium sp. и Lactobacillus sp в незрелом кишечнике могут иметь решающее значение в патогенезе НЭК.Предполагается, что использование пробиотиков (препарат, содержащий Lactobacillus ) может иметь защитную роль у этих младенцев, чтобы предотвратить НЭК и другие желудочно-кишечные осложнения.

ПОДТВЕРЖДЕНИЕ

Эта работа была поддержана грантом Fogarty 1 RO3 TW 00601 от NIH, США. Мы хотели бы поблагодарить участвующую команду отделения педиатрии NICU, AIIMS за предоставленные кейсы.

Сноски

Источник поддержки: Fogarty Grant 1RO3 TW 00601 от NIH, США

Конфликт интересов: Не заявлено

ССЫЛКИ

Количественное и качественное исследование кишечной флоры новорожденных

J Glob Infect Dis.2012 октябрь-декабрь; 4 (4): 188–192.

Нидхи Шарма

Отдел микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

Рама Чаудхри

Отдел микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

Пинаки Паниграхи

¹ Департамент эпидемиологии и педиатрии, Центр глобального здоровья и развития, Колледж общественного здравоохранения, Медицинский центр Университета Небраски, Омаха, штат Нью-Йорк, США

Департамент микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

¹ Департамент эпидемиологии и педиатрии, Центр глобального здоровья и развития, Колледж общественного здравоохранения, Медицинский центр Университета Небраски, Омаха, штат Нью-Йорк, США

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями Creative Commons Attribution-Nonco. mmercial-Share Alike 3.0 Unported, что разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Abstract

Предпосылки:

В неонатальном периоде развивающаяся функция кишечного барьера обеспечивает неоптимальную защиту слизистой оболочки от инфекции. Установление нормальной комменсальной микрофлоры играет жизненно важную роль в этом процессе.

Цели:

Определить аэробные и анаэробные бактерии количественными и качественными методами в образцах фекалий новорожденных.

Условия и дизайн:

Проспективное исследование было проведено в двух группах в больнице третичного уровня: в группе А были недоношенные дети и в группе В — доношенные дети.

Материалы и методы:

В исследование были включены 62 недоношенных ребенка с массой тела <1500 г и гестационным возрастом <34 недель и 29 доношенных новорожденных в возрасте 4 недель. Количественное определение бактериальной нагрузки проводили с помощью десятикратных серийных разведений на соответствующих средах.

Статистический анализ:

Данные были проанализированы с помощью EPIINFO-Ver 6.04.

Результаты и выводы:

Преобладающей аэробной бактерией была Klebsiella pneumoniae . У недоношенных младенцев аэробные бактерии были колонизированы в среднем 2,1 и анаэробными бактериями 0,1. Количественный анализ показал, что количество бактериальных колоний в фекалиях находится в диапазоне 10 ⁴ -10 ¹³ КОЕ / г. Грамотрицательные и грамположительные бактерии постепенно увеличивались с интервалом от 2 до 3 недель. Среднее значение log КОЕ грамотрицательных бактерий и грамположительных бактерий было статистически незначимым с 3 по 14 день ( P > 0.05). На 21 день наблюдалось значительное изменение колонизации обоих бактериальных sp ( P <0,05). Потенциальные патогенные аэробные бактерии преобладают в кишечной флоре недоношенных детей, находящихся на вскармливании в неонатальном отделении. Необходимо изучить меры по устранению этого дисбаланса в микроэкологии кишечника недоношенных детей.

Ключевые слова: Бактериальная флора, фекалии, кишечник, новорожденные, количественное определение

ВВЕДЕНИЕ

В неонатальный период формирование нормальной комменсальной микрофлоры играет важную роль в развитии защиты слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.Сообщалось, что бактериальная флора недоношенных детей в отделении интенсивной терапии новорожденных (ОИТН) отличается от здоровых доношенных детей. [1,2] У здоровых желудочно-кишечный тракт доношенных новорожденных был колонизирован разнообразной микрофлорой. в течение 10 дней жизни, тогда как у недоношенных детей микрофлора не получает возможности для колонизации. У младенцев с низкой массой тела при рождении это важный фактор риска неонатальной смертности и заболеваемости, включая сепсис и желудочно-кишечные расстройства.[3,4] Большинство этих младенцев обычно получают лечение антибиотиками широкого спектра действия в условиях интенсивной терапии интенсивной терапии вскоре после рождения. Таким образом, бактериальная флора этих младенцев характеризуется отложенной колонизацией желудочно-кишечного тракта ограниченным количеством бактерий. [5] Однако имеется ограниченная литература, касающаяся микробной флоры у недоношенных детей, особенно у детей с низкой массой тела при рождении (<1500 г), которые предрасположены к различным инфекционным и желудочно-кишечным осложнениям, таким как некротический энтероколит (НЭК).Таким образом, это исследование было проведено с целью определения фекальной микрофлоры у недоношенных детей, поступивших в отделение интенсивной терапии стационара третичного уровня, чтобы оценить риск развития желудочно-кишечных осложнений у этих детей.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Проспективное исследование (Фаза-I) было проведено в двух группах во Всеиндийском институте медицинских наук, Нью-Дели, Индия, после того, как оно было одобрено с этической точки зрения. В группу А вошли шестьдесят два недоношенных ребенка с массой тела <1500 г и сроком беременности <34 недель.Из 62 случаев было проведено количественное определение 34 образцов стула и качественный анализ фекальной бактериальной флоры в 28. Образцы были собраны на 3, 7, 14, 21 день (все ± 2 дня) у 34 детей. В группе Б обследовано 29 доношенных новорожденных. Образцы кала были качественно проанализированы.

Один грамм образца стула переносили во флакон со стеклянными шариками (SIGMA Chemicals Co., США), содержащий 1 мл стерильного физиологического раствора, и встряхивали. Готовили десятикратные серийные разведения (10 ² -10 ⁹ ) и 10 мкл каждого разведения культивировали на 5% овечьей крови и агаре МакКонки (Difco Chemicals) для аэробных бактерий.Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 48 часов и исследовали через 24 часа и 48 часов. Бактерии были идентифицированы с помощью обычных биохимических тестов, а также с помощью системы API, то есть теста API 20 E, API staph / strep (bioMerieux Vitek Inc.) для различных грамположительных и отрицательных организмов. Для анаэробного культивирования образцы стула высевали на агар для инфузии сердца Brain (Hi-Media Laboratories, Pvt. Ltd. India) с добавлением гемина (Hi-Media Laboratories, Pvt. Ltd. India) и Vit K (Hi-Media Laboratories, Pvt.Ltd. India) и инкубировали в анаэробных условиях при 37 ° C в течение от 48 часов до 72 часов. Анаэробные бактерии были идентифицированы обычными биохимическими методами и системой RapID ANA (Innovative Diagnostic System Inc Norcross, GA).

Общее количество бактерий на грамм стула сообщалось в каждом образце количественного исследования.

Статистика

Подсчет колоний организмов выражали как log ₁₀ подсчет. Для статистических сравнений использовали средний логарифм КОЕ. Данные были проанализированы с помощью EPIINFO-Ver 6.04. Статистический метод для непрерывных переменных использовался с применением t-критерия или критерия Манна-Уитни (где применимо), а для категориальных переменных использовались хи-квадрат или точный критерий Фишера (для сравнения количества колонизированных младенцев). Значимость наблюдалась, если P <0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Всего в это исследование был включен 91 ребенок для определения структуры кишечной флоры новорожденных.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Общее количество колоний аэробных бактерий колебалось от 10 ⁴ до 10 ¹³ КОЕ / г.Показатели колонизации наиболее часто выделяемых бактерий приведены в. Характер колонизации изменялся через разные промежутки времени в конце сбора образцов (d21). Количество фекальных бактерий, как грамотрицательных, так и грамположительных, постепенно увеличивалось в течение 2–3 недель. Некоторые образцы нельзя было собрать в определенный промежуток времени, потому что у младенцев не было стула.

Таблица 1

Общее количество бактериальных изолятов у недоношенных детей (Группа A)

Колонизация грамотрицательных организмов увеличивалась с 1 по 21 день во время пребывания в отделении интенсивной терапии.Наблюдалось последовательное увеличение общего числа видов бактерий и значительные изменения в структуре колонизации отдельными видами бактерий с течением времени. К концу первого месяца жизни значительный процент детского стула был заселен Klebsiella pneumoniae ; 17,8% на 3 день, 50% на 7 день, 61% на 14 день, 60% на 21 день ( P <0,05) и E. coli ; 35% на 3-й день, 40% на 7-й день, 38% на 14-й день и 60% на 21-й день. Среднее log КОЕ грамотрицательных бактерий и грамположительных бактерий было статистически незначимым с 3-го по 14-й день ( P > 0). .05). На 21 день наблюдалось значительное изменение колонизации обоих бактериальных sp ( P <0,05) []. Salmonella senftenberg, Salmonella typhi, Salmonella gallinarum, Klebsiella oxytoca были обнаружены только у младенцев с клиническим анамнезом НЭК.

Таблица 2

Среднее значение log КОЕ у младенцев <1500 г

КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Колонизированными грамотрицательными и положительными аэробными организмами были Klebsiella pneumoniae 41,3%, Escherichia coli 24.1%, Proteus sp 10,3%, Enterococcus faecium 34,4%, Staphylococcus epidermidis 6,8% и Micrococcus sp 3,4% [] и колонизация анаэробных организмов составила Bifidobacterium sp (13,4%) и Clostridium biferment (3,4%). Наблюдалась статистически значимая разница в росте грамположительных организмов в обеих группах ( P <0,05), которая оказалась низкой у недоношенных детей. Рост защитных организмов (полезных бактерий) был статистически незначимым ( P > 0.05) в обеих группах.

Таблица 3

Общее количество видов бактерий у недоношенных и доношенных детей

ОБСУЖДЕНИЕ

Характер бактериальной колонизации в кишечнике новорожденных зависит от различных факторов; гестационный возраст, способ родоразрешения, тип кормления, бактериальные взаимодействия, антимикробная терапия и другие факторы окружающей среды. Сообщалось, что колонизация микрофлоры у детей, вскармливаемых грудью, отличается от кормления молочными смесями. [4,5] Некоторые авторы обнаружили, что фекальная микрофлора у детей, вскармливаемых грудью и детей, вскармливаемых смесью, по существу одинакова; другие показали, что Bifidobacteria являются преобладающей флорой в фекалиях младенцев, вскармливаемых грудью.[6,7] Эти исследования были сосредоточены на доношенных детях и показали, что желудочно-кишечный тракт здоровых доношенных новорожденных колонизирован различными типами аэробных и анаэробных микробных организмов. [8,9]

Iseki K изучал развитие фекальной флоры, как аэробные, так и анаэробные при введении различных кормовых смесей, и наблюдали, как в кишечнике новорожденных сначала колонизировались представители Enterobacteriaceae в первый день жизни, которое постепенно уменьшается на 6 ^{-й день} , за которым следует Bifidobacteria , которое увеличивалось через 2-3 дня после приема пищи. жизнь грудного вскармливания младенцев.Однако количество других бактерий (энтеробактерий) было больше у детей, вскармливаемых из бутылочки, чем у детей, вскармливаемых грудью. Эти результаты свидетельствуют о том, что грудное вскармливание защищает незрелый кишечник от системных инфекций. [10] Ира HG и др. . сообщили, что популяция грамположительных бактерий была выше, чем грамотрицательных бактерий у детей с низкой массой тела при рождении, а характер бактериальной колонизации был аналогичен как у детей, вскармливаемых грудным молоком, так и у детей, вскармливаемых молочной смесью, в условиях США. Они выделили Lactobacillus sp.и Bifidobacterium sp. только у одного младенца, находящегося на грудном вскармливании. [11] В другом исследовании было замечено, что представители Enterobacteriaceae, Enterococcus sp. и Staphylococcus sp. были колонизированы в течение 7 ^-го -го дня жизни без антибактериальной терапии доношенных новорожденных. В исследовании, проведенном Стивенсом Д.К. и сотрудниками, 20 младенцев, которых кормили молочными смесями из хранимых смесей и патентованными смесями на второй неделе жизни среди госпитализированных недоношенных детей, продемонстрировали картину кишечной флоры, отличную от нормальных доношенных детей, что может привести к внутрибольничному сепсису и увеличению заболеваемости системных и локализованных инфекций.Доказано, что использование замороженного грудного молока для подавления колиформных и других потенциально патогенных организмов неэффективно у этих госпитализированных недоношенных новорожденных, особенно тех, которые лечились антибиотиками широкого спектра действия. [12,13] Настоящее исследование было запланировано для определения различных аэробная и анаэробная фекальная бактериальная флора недоношенных детей (<1500 г) в условиях интенсивной терапии интенсивной терапии. В нашем исследовании большинство младенцев были колонизированы 2-3 видами бактерий в обеих группах, преобладающими видами были Klebsiella pneumoniae и E.coli . Уровень колонизации грамотрицательных бактерий был высоким как у недоношенных, так и у доношенных детей, тогда как количество грамположительных бактерий было меньше у недоношенных. Бактериальная колонизация недоношенного кишечника, вероятно, играет роль в патогенезе и предрасположенности к желудочно-кишечным осложнениям, таким как некротический энтероколит (НЭК). Вестра-Мейер и др. . исследовали аэробную и анаэробную фекальную флору при некротическом энтероколите новорожденных, чтобы установить связь между колонизацией конкретной бактериальной флорой и развитием NEC, и сообщили, что уровень выделения грамположительных кокков (GPC) был выше, чем грамотрицательных бацилл (GNB).Обычно выделяемыми аэробными бактериями были Staphylococcus epidermidis (61%), Enterococcus sp. (56%), Klebsiella sp. (37%) и E.coli (29%), а анаэробными организмами были Clostridium sp (61%) и Bacteroides sp (20%). В их исследовании аэробные и анаэробные виды бактерий колонизировали в среднем 2,1 и 0,8 на грамм стула соответственно. Они предположили, что не было значительной разницы в характере колонизации бактерий между исследуемой и контрольной группами.Важным отличием было то, что колонизация Klebsiella sp была выше у тех детей, у которых в анамнезе был диагностирован НЭК [14], тогда как в текущем исследовании Salmonella senftenberg, E.coli, Salmonella typhi, Salmonella gallinarum и Klebsiella oxytoca выращивали у детей с диагнозом NEC. Было высказано предположение, что патогенная кишечная флора может играть роль в предрасположенности новорожденных к внутрибольничному сепсису и НЭК [15,16] Hoy et al .сообщили, что снижение количества некоторых видов бактерий в фекальной флоре из-за изменения pH после бактериальной ферментации в тонком кишечнике изменяет внутрипросветные условия и предшествует клиническому началу НЭК [17].

Холл и др. . обнаружили дефицит Lactobacilli по сравнению с бактериями формы кишечной палочки у недоношенных детей, которые находились на лечении в отделении интенсивной терапии, и высокое количество Lactobacillus у доношенных детей к 30-дневному возрасту. Это исследование указывает на недостаток полезной флоры у недоношенных детей.[18] Аэробные и анаэробные виды бактерий у недоношенных новорожденных с НЭК или без них были колонизированы в среднем на 2,1 и 0,1 на грамм стула соответственно. В настоящем исследовании Lactobacillus sp. был выделен только в одном образце стула на 7-14 день, тогда как у доношенных новорожденных Bifidobacterium sp были выделены у 4/29 (13,7%), в отличие от Rubatelli et al . из Италии, который сообщил о высокой распространенности Bifidobacterium sp. (47,6%) у детей, вскармливаемых грудью, и Klessen et al .у 89% детей, вскармливаемых грудью, на 7 ^-й -й день жизни, которая увеличилась до 95% к 30 ^-й -й день, Lactobacilli были выделены в 12/19 (63%) проб стула на 7 ^{-й день.} дня и увеличилась до 80-85% в течение двух месяцев. [19,20] Однако удивительно, что в настоящем исследовании Lactobacilli не были выделены ни в одном образце стула грудных младенцев за период 1 -2 месяца. Также выделение Bifidobacterium sp.число доношенных детей было низким по сравнению с вышеупомянутым исследованием. В связи с нашим открытием, необходимо рассмотреть важный вопрос: лучше ли колонизируются дети, вскармливаемые грудью, анаэробами в нашей стране? Большинство недоношенных детей в отделении интенсивной терапии получали антибиотики широкого спектра действия и частично или полностью кормились сцеженным грудным молоком, что может быть фактором, ограничивающим бактериальную колонизацию в кишечнике. Необходимо изучить меры, которые «нормализуют» микробную экологию кишечника. У здоровых доношенных детей грудное молоко способствует колонизации Bifidobacterium и Lactobacillus sp.[21] Показания к грудному вскармливанию просто на основании того, что они помогают нормальному развитию кишечной флоры, для борьбы с кишечной инфекцией, должны быть пересмотрены. Циркулирующее микробное давление в окружающей среде в развивающихся странах, таких как Индия, может препятствовать колонизации анаэробными неспорообразующими грамположительными бациллами, такими как Bifidobacterium , а также Lactobacillus . В нашем предыдущем исследовании мы обнаружили умеренную степень колонизации Lactobacilli у более крупных недоношенных детей (> 1500 г), которых кормили пробиотиком Lactobacillus rahmnosus . ГГ .В последние годы несколько исследований, включая наше исследование, показали, что многие препараты Lactobacillus могут колонизировать кишечник недоношенных новорожденных и изменять кишечную флору, но приводит ли такая колонизация к клинически значимому улучшению, еще предстоит изучить [22, 23]

Представленные здесь данные основаны на микробиологической изоляции в обычных аэробных и анаэробных средах. Недавние отчеты предполагают, что молекулярные инструменты, основанные на сходстве последовательностей 16 S рДНК, такие как флуоресцентная гибридизация in-situ (FISH) и денатурирующий градиентный гель-электрофорез (DGGE), помогли преодолеть ограничения традиционных методов микробиологической культуры при изучении состава фекальной микрофлоры.Эти инструменты успешно применялись для изучения развития детской микрофлоры, изменений микрофлоры человека в процессе старения, воздействия пребиотиков и пробиотиков на состав микрофлоры человека, а также влияния диетических вмешательств на микрофлору кишечника [24]. ]

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Мы пришли к выводу, что специфическая микробная экология модели колонизации и отсутствие защитных грамположительных анаэробных бактерий, особенно Bifidobacterium sp. и Lactobacillus sp в незрелом кишечнике могут иметь решающее значение в патогенезе НЭК.Предполагается, что использование пробиотиков (препарат, содержащий Lactobacillus ) может иметь защитную роль у этих младенцев, чтобы предотвратить НЭК и другие желудочно-кишечные осложнения.

ПОДТВЕРЖДЕНИЕ

Эта работа была поддержана грантом Fogarty 1 RO3 TW 00601 от NIH, США. Мы хотели бы поблагодарить участвующую команду отделения педиатрии NICU, AIIMS за предоставленные кейсы.

Сноски

Источник поддержки: Fogarty Grant 1RO3 TW 00601 от NIH, США

Конфликт интересов: Не заявлено

ССЫЛКИ

Количественное и качественное исследование кишечной флоры новорожденных

J Glob Infect Dis.2012 октябрь-декабрь; 4 (4): 188–192.

Нидхи Шарма

Отдел микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

Рама Чаудхри

Отдел микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

Пинаки Паниграхи

¹ Департамент эпидемиологии и педиатрии, Центр глобального здоровья и развития, Колледж общественного здравоохранения, Медицинский центр Университета Небраски, Омаха, штат Нью-Йорк, США

Департамент микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

¹ Департамент эпидемиологии и педиатрии, Центр глобального здоровья и развития, Колледж общественного здравоохранения, Медицинский центр Университета Небраски, Омаха, штат Нью-Йорк, США

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями Creative Commons Attribution-Nonco. mmercial-Share Alike 3.0 Unported, что разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Abstract

Предпосылки:

В неонатальном периоде развивающаяся функция кишечного барьера обеспечивает неоптимальную защиту слизистой оболочки от инфекции. Установление нормальной комменсальной микрофлоры играет жизненно важную роль в этом процессе.

Цели:

Определить аэробные и анаэробные бактерии количественными и качественными методами в образцах фекалий новорожденных.

Условия и дизайн:

Проспективное исследование было проведено в двух группах в больнице третичного уровня: в группе А были недоношенные дети и в группе В — доношенные дети.

Материалы и методы:

В исследование были включены 62 недоношенных ребенка с массой тела <1500 г и гестационным возрастом <34 недель и 29 доношенных новорожденных в возрасте 4 недель. Количественное определение бактериальной нагрузки проводили с помощью десятикратных серийных разведений на соответствующих средах.

Статистический анализ:

Данные были проанализированы с помощью EPIINFO-Ver 6.04.

Результаты и выводы:

Преобладающей аэробной бактерией была Klebsiella pneumoniae . У недоношенных младенцев аэробные бактерии были колонизированы в среднем 2,1 и анаэробными бактериями 0,1. Количественный анализ показал, что количество бактериальных колоний в фекалиях находится в диапазоне 10 ⁴ -10 ¹³ КОЕ / г. Грамотрицательные и грамположительные бактерии постепенно увеличивались с интервалом от 2 до 3 недель. Среднее значение log КОЕ грамотрицательных бактерий и грамположительных бактерий было статистически незначимым с 3 по 14 день ( P > 0.05). На 21 день наблюдалось значительное изменение колонизации обоих бактериальных sp ( P <0,05). Потенциальные патогенные аэробные бактерии преобладают в кишечной флоре недоношенных детей, находящихся на вскармливании в неонатальном отделении. Необходимо изучить меры по устранению этого дисбаланса в микроэкологии кишечника недоношенных детей.

Ключевые слова: Бактериальная флора, фекалии, кишечник, новорожденные, количественное определение

ВВЕДЕНИЕ

В неонатальный период формирование нормальной комменсальной микрофлоры играет важную роль в развитии защиты слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.Сообщалось, что бактериальная флора недоношенных детей в отделении интенсивной терапии новорожденных (ОИТН) отличается от здоровых доношенных детей. [1,2] У здоровых желудочно-кишечный тракт доношенных новорожденных был колонизирован разнообразной микрофлорой. в течение 10 дней жизни, тогда как у недоношенных детей микрофлора не получает возможности для колонизации. У младенцев с низкой массой тела при рождении это важный фактор риска неонатальной смертности и заболеваемости, включая сепсис и желудочно-кишечные расстройства.[3,4] Большинство этих младенцев обычно получают лечение антибиотиками широкого спектра действия в условиях интенсивной терапии интенсивной терапии вскоре после рождения. Таким образом, бактериальная флора этих младенцев характеризуется отложенной колонизацией желудочно-кишечного тракта ограниченным количеством бактерий. [5] Однако имеется ограниченная литература, касающаяся микробной флоры у недоношенных детей, особенно у детей с низкой массой тела при рождении (<1500 г), которые предрасположены к различным инфекционным и желудочно-кишечным осложнениям, таким как некротический энтероколит (НЭК).Таким образом, это исследование было проведено с целью определения фекальной микрофлоры у недоношенных детей, поступивших в отделение интенсивной терапии стационара третичного уровня, чтобы оценить риск развития желудочно-кишечных осложнений у этих детей.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Проспективное исследование (Фаза-I) было проведено в двух группах во Всеиндийском институте медицинских наук, Нью-Дели, Индия, после того, как оно было одобрено с этической точки зрения. В группу А вошли шестьдесят два недоношенных ребенка с массой тела <1500 г и сроком беременности <34 недель.Из 62 случаев было проведено количественное определение 34 образцов стула и качественный анализ фекальной бактериальной флоры в 28. Образцы были собраны на 3, 7, 14, 21 день (все ± 2 дня) у 34 детей. В группе Б обследовано 29 доношенных новорожденных. Образцы кала были качественно проанализированы.

Один грамм образца стула переносили во флакон со стеклянными шариками (SIGMA Chemicals Co., США), содержащий 1 мл стерильного физиологического раствора, и встряхивали. Готовили десятикратные серийные разведения (10 ² -10 ⁹ ) и 10 мкл каждого разведения культивировали на 5% овечьей крови и агаре МакКонки (Difco Chemicals) для аэробных бактерий.Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 48 часов и исследовали через 24 часа и 48 часов. Бактерии были идентифицированы с помощью обычных биохимических тестов, а также с помощью системы API, то есть теста API 20 E, API staph / strep (bioMerieux Vitek Inc.) для различных грамположительных и отрицательных организмов. Для анаэробного культивирования образцы стула высевали на агар для инфузии сердца Brain (Hi-Media Laboratories, Pvt. Ltd. India) с добавлением гемина (Hi-Media Laboratories, Pvt. Ltd. India) и Vit K (Hi-Media Laboratories, Pvt.Ltd. India) и инкубировали в анаэробных условиях при 37 ° C в течение от 48 часов до 72 часов. Анаэробные бактерии были идентифицированы обычными биохимическими методами и системой RapID ANA (Innovative Diagnostic System Inc Norcross, GA).

Общее количество бактерий на грамм стула сообщалось в каждом образце количественного исследования.

Статистика

Подсчет колоний организмов выражали как log ₁₀ подсчет. Для статистических сравнений использовали средний логарифм КОЕ. Данные были проанализированы с помощью EPIINFO-Ver 6.04. Статистический метод для непрерывных переменных использовался с применением t-критерия или критерия Манна-Уитни (где применимо), а для категориальных переменных использовались хи-квадрат или точный критерий Фишера (для сравнения количества колонизированных младенцев). Значимость наблюдалась, если P <0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Всего в это исследование был включен 91 ребенок для определения структуры кишечной флоры новорожденных.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Общее количество колоний аэробных бактерий колебалось от 10 ⁴ до 10 ¹³ КОЕ / г.Показатели колонизации наиболее часто выделяемых бактерий приведены в. Характер колонизации изменялся через разные промежутки времени в конце сбора образцов (d21). Количество фекальных бактерий, как грамотрицательных, так и грамположительных, постепенно увеличивалось в течение 2–3 недель. Некоторые образцы нельзя было собрать в определенный промежуток времени, потому что у младенцев не было стула.

Таблица 1

Общее количество бактериальных изолятов у недоношенных детей (Группа A)

Колонизация грамотрицательных организмов увеличивалась с 1 по 21 день во время пребывания в отделении интенсивной терапии.Наблюдалось последовательное увеличение общего числа видов бактерий и значительные изменения в структуре колонизации отдельными видами бактерий с течением времени. К концу первого месяца жизни значительный процент детского стула был заселен Klebsiella pneumoniae ; 17,8% на 3 день, 50% на 7 день, 61% на 14 день, 60% на 21 день ( P <0,05) и E. coli ; 35% на 3-й день, 40% на 7-й день, 38% на 14-й день и 60% на 21-й день. Среднее log КОЕ грамотрицательных бактерий и грамположительных бактерий было статистически незначимым с 3-го по 14-й день ( P > 0). .05). На 21 день наблюдалось значительное изменение колонизации обоих бактериальных sp ( P <0,05) []. Salmonella senftenberg, Salmonella typhi, Salmonella gallinarum, Klebsiella oxytoca были обнаружены только у младенцев с клиническим анамнезом НЭК.

Таблица 2

Среднее значение log КОЕ у младенцев <1500 г

КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Колонизированными грамотрицательными и положительными аэробными организмами были Klebsiella pneumoniae 41,3%, Escherichia coli 24.1%, Proteus sp 10,3%, Enterococcus faecium 34,4%, Staphylococcus epidermidis 6,8% и Micrococcus sp 3,4% [] и колонизация анаэробных организмов составила Bifidobacterium sp (13,4%) и Clostridium biferment (3,4%). Наблюдалась статистически значимая разница в росте грамположительных организмов в обеих группах ( P <0,05), которая оказалась низкой у недоношенных детей. Рост защитных организмов (полезных бактерий) был статистически незначимым ( P > 0.05) в обеих группах.

Таблица 3

Общее количество видов бактерий у недоношенных и доношенных детей

ОБСУЖДЕНИЕ

Характер бактериальной колонизации в кишечнике новорожденных зависит от различных факторов; гестационный возраст, способ родоразрешения, тип кормления, бактериальные взаимодействия, антимикробная терапия и другие факторы окружающей среды. Сообщалось, что колонизация микрофлоры у детей, вскармливаемых грудью, отличается от кормления молочными смесями. [4,5] Некоторые авторы обнаружили, что фекальная микрофлора у детей, вскармливаемых грудью и детей, вскармливаемых смесью, по существу одинакова; другие показали, что Bifidobacteria являются преобладающей флорой в фекалиях младенцев, вскармливаемых грудью.[6,7] Эти исследования были сосредоточены на доношенных детях и показали, что желудочно-кишечный тракт здоровых доношенных новорожденных колонизирован различными типами аэробных и анаэробных микробных организмов. [8,9]

Iseki K изучал развитие фекальной флоры, как аэробные, так и анаэробные при введении различных кормовых смесей, и наблюдали, как в кишечнике новорожденных сначала колонизировались представители Enterobacteriaceae в первый день жизни, которое постепенно уменьшается на 6 ^{-й день} , за которым следует Bifidobacteria , которое увеличивалось через 2-3 дня после приема пищи. жизнь грудного вскармливания младенцев.Однако количество других бактерий (энтеробактерий) было больше у детей, вскармливаемых из бутылочки, чем у детей, вскармливаемых грудью. Эти результаты свидетельствуют о том, что грудное вскармливание защищает незрелый кишечник от системных инфекций. [10] Ира HG и др. . сообщили, что популяция грамположительных бактерий была выше, чем грамотрицательных бактерий у детей с низкой массой тела при рождении, а характер бактериальной колонизации был аналогичен как у детей, вскармливаемых грудным молоком, так и у детей, вскармливаемых молочной смесью, в условиях США. Они выделили Lactobacillus sp.и Bifidobacterium sp. только у одного младенца, находящегося на грудном вскармливании. [11] В другом исследовании было замечено, что представители Enterobacteriaceae, Enterococcus sp. и Staphylococcus sp. были колонизированы в течение 7 ^-го -го дня жизни без антибактериальной терапии доношенных новорожденных. В исследовании, проведенном Стивенсом Д.К. и сотрудниками, 20 младенцев, которых кормили молочными смесями из хранимых смесей и патентованными смесями на второй неделе жизни среди госпитализированных недоношенных детей, продемонстрировали картину кишечной флоры, отличную от нормальных доношенных детей, что может привести к внутрибольничному сепсису и увеличению заболеваемости системных и локализованных инфекций.Доказано, что использование замороженного грудного молока для подавления колиформных и других потенциально патогенных организмов неэффективно у этих госпитализированных недоношенных новорожденных, особенно тех, которые лечились антибиотиками широкого спектра действия. [12,13] Настоящее исследование было запланировано для определения различных аэробная и анаэробная фекальная бактериальная флора недоношенных детей (<1500 г) в условиях интенсивной терапии интенсивной терапии. В нашем исследовании большинство младенцев были колонизированы 2-3 видами бактерий в обеих группах, преобладающими видами были Klebsiella pneumoniae и E.coli . Уровень колонизации грамотрицательных бактерий был высоким как у недоношенных, так и у доношенных детей, тогда как количество грамположительных бактерий было меньше у недоношенных. Бактериальная колонизация недоношенного кишечника, вероятно, играет роль в патогенезе и предрасположенности к желудочно-кишечным осложнениям, таким как некротический энтероколит (НЭК). Вестра-Мейер и др. . исследовали аэробную и анаэробную фекальную флору при некротическом энтероколите новорожденных, чтобы установить связь между колонизацией конкретной бактериальной флорой и развитием NEC, и сообщили, что уровень выделения грамположительных кокков (GPC) был выше, чем грамотрицательных бацилл (GNB).Обычно выделяемыми аэробными бактериями были Staphylococcus epidermidis (61%), Enterococcus sp. (56%), Klebsiella sp. (37%) и E.coli (29%), а анаэробными организмами были Clostridium sp (61%) и Bacteroides sp (20%). В их исследовании аэробные и анаэробные виды бактерий колонизировали в среднем 2,1 и 0,8 на грамм стула соответственно. Они предположили, что не было значительной разницы в характере колонизации бактерий между исследуемой и контрольной группами.Важным отличием было то, что колонизация Klebsiella sp была выше у тех детей, у которых в анамнезе был диагностирован НЭК [14], тогда как в текущем исследовании Salmonella senftenberg, E.coli, Salmonella typhi, Salmonella gallinarum и Klebsiella oxytoca выращивали у детей с диагнозом NEC. Было высказано предположение, что патогенная кишечная флора может играть роль в предрасположенности новорожденных к внутрибольничному сепсису и НЭК [15,16] Hoy et al .сообщили, что снижение количества некоторых видов бактерий в фекальной флоре из-за изменения pH после бактериальной ферментации в тонком кишечнике изменяет внутрипросветные условия и предшествует клиническому началу НЭК [17].

Холл и др. . обнаружили дефицит Lactobacilli по сравнению с бактериями формы кишечной палочки у недоношенных детей, которые находились на лечении в отделении интенсивной терапии, и высокое количество Lactobacillus у доношенных детей к 30-дневному возрасту. Это исследование указывает на недостаток полезной флоры у недоношенных детей.[18] Аэробные и анаэробные виды бактерий у недоношенных новорожденных с НЭК или без них были колонизированы в среднем на 2,1 и 0,1 на грамм стула соответственно. В настоящем исследовании Lactobacillus sp. был выделен только в одном образце стула на 7-14 день, тогда как у доношенных новорожденных Bifidobacterium sp были выделены у 4/29 (13,7%), в отличие от Rubatelli et al . из Италии, который сообщил о высокой распространенности Bifidobacterium sp. (47,6%) у детей, вскармливаемых грудью, и Klessen et al .у 89% детей, вскармливаемых грудью, на 7 ^-й -й день жизни, которая увеличилась до 95% к 30 ^-й -й день, Lactobacilli были выделены в 12/19 (63%) проб стула на 7 ^{-й день.} дня и увеличилась до 80-85% в течение двух месяцев. [19,20] Однако удивительно, что в настоящем исследовании Lactobacilli не были выделены ни в одном образце стула грудных младенцев за период 1 -2 месяца. Также выделение Bifidobacterium sp.число доношенных детей было низким по сравнению с вышеупомянутым исследованием. В связи с нашим открытием, необходимо рассмотреть важный вопрос: лучше ли колонизируются дети, вскармливаемые грудью, анаэробами в нашей стране? Большинство недоношенных детей в отделении интенсивной терапии получали антибиотики широкого спектра действия и частично или полностью кормились сцеженным грудным молоком, что может быть фактором, ограничивающим бактериальную колонизацию в кишечнике. Необходимо изучить меры, которые «нормализуют» микробную экологию кишечника. У здоровых доношенных детей грудное молоко способствует колонизации Bifidobacterium и Lactobacillus sp.[21] Показания к грудному вскармливанию просто на основании того, что они помогают нормальному развитию кишечной флоры, для борьбы с кишечной инфекцией, должны быть пересмотрены. Циркулирующее микробное давление в окружающей среде в развивающихся странах, таких как Индия, может препятствовать колонизации анаэробными неспорообразующими грамположительными бациллами, такими как Bifidobacterium , а также Lactobacillus . В нашем предыдущем исследовании мы обнаружили умеренную степень колонизации Lactobacilli у более крупных недоношенных детей (> 1500 г), которых кормили пробиотиком Lactobacillus rahmnosus . ГГ .В последние годы несколько исследований, включая наше исследование, показали, что многие препараты Lactobacillus могут колонизировать кишечник недоношенных новорожденных и изменять кишечную флору, но приводит ли такая колонизация к клинически значимому улучшению, еще предстоит изучить [22, 23]

Представленные здесь данные основаны на микробиологической изоляции в обычных аэробных и анаэробных средах. Недавние отчеты предполагают, что молекулярные инструменты, основанные на сходстве последовательностей 16 S рДНК, такие как флуоресцентная гибридизация in-situ (FISH) и денатурирующий градиентный гель-электрофорез (DGGE), помогли преодолеть ограничения традиционных методов микробиологической культуры при изучении состава фекальной микрофлоры.Эти инструменты успешно применялись для изучения развития детской микрофлоры, изменений микрофлоры человека в процессе старения, воздействия пребиотиков и пробиотиков на состав микрофлоры человека, а также влияния диетических вмешательств на микрофлору кишечника [24]. ]

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Мы пришли к выводу, что специфическая микробная экология модели колонизации и отсутствие защитных грамположительных анаэробных бактерий, особенно Bifidobacterium sp. и Lactobacillus sp в незрелом кишечнике могут иметь решающее значение в патогенезе НЭК.Предполагается, что использование пробиотиков (препарат, содержащий Lactobacillus ) может иметь защитную роль у этих младенцев, чтобы предотвратить НЭК и другие желудочно-кишечные осложнения.

ПОДТВЕРЖДЕНИЕ

Эта работа была поддержана грантом Fogarty 1 RO3 TW 00601 от NIH, США. Мы хотели бы поблагодарить участвующую команду отделения педиатрии NICU, AIIMS за предоставленные кейсы.

Сноски

Источник поддержки: Fogarty Grant 1RO3 TW 00601 от NIH, США

Конфликт интересов: Не заявлено

ССЫЛКИ

Количественное и качественное исследование кишечной флоры новорожденных

J Glob Infect Dis.2012 октябрь-декабрь; 4 (4): 188–192.

Нидхи Шарма

Отдел микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

Рама Чаудхри

Отдел микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

Пинаки Паниграхи

¹ Департамент эпидемиологии и педиатрии, Центр глобального здоровья и развития, Колледж общественного здравоохранения, Медицинский центр Университета Небраски, Омаха, штат Нью-Йорк, США

Департамент микробиологии Всеиндийского института медицинских наук, Нью-Дели, Индия

¹ Департамент эпидемиологии и педиатрии, Центр глобального здоровья и развития, Колледж общественного здравоохранения, Медицинский центр Университета Небраски, Омаха, штат Нью-Йорк, США

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями Creative Commons Attribution-Nonco. mmercial-Share Alike 3.0 Unported, что разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Abstract

Предпосылки:

В неонатальном периоде развивающаяся функция кишечного барьера обеспечивает неоптимальную защиту слизистой оболочки от инфекции. Установление нормальной комменсальной микрофлоры играет жизненно важную роль в этом процессе.

Цели:

Определить аэробные и анаэробные бактерии количественными и качественными методами в образцах фекалий новорожденных.

Условия и дизайн:

Проспективное исследование было проведено в двух группах в больнице третичного уровня: в группе А были недоношенные дети и в группе В — доношенные дети.

Материалы и методы:

В исследование были включены 62 недоношенных ребенка с массой тела <1500 г и гестационным возрастом <34 недель и 29 доношенных новорожденных в возрасте 4 недель. Количественное определение бактериальной нагрузки проводили с помощью десятикратных серийных разведений на соответствующих средах.

Статистический анализ:

Данные были проанализированы с помощью EPIINFO-Ver 6.04.

Результаты и выводы:

Преобладающей аэробной бактерией была Klebsiella pneumoniae . У недоношенных младенцев аэробные бактерии были колонизированы в среднем 2,1 и анаэробными бактериями 0,1. Количественный анализ показал, что количество бактериальных колоний в фекалиях находится в диапазоне 10 ⁴ -10 ¹³ КОЕ / г. Грамотрицательные и грамположительные бактерии постепенно увеличивались с интервалом от 2 до 3 недель. Среднее значение log КОЕ грамотрицательных бактерий и грамположительных бактерий было статистически незначимым с 3 по 14 день ( P > 0.05). На 21 день наблюдалось значительное изменение колонизации обоих бактериальных sp ( P <0,05). Потенциальные патогенные аэробные бактерии преобладают в кишечной флоре недоношенных детей, находящихся на вскармливании в неонатальном отделении. Необходимо изучить меры по устранению этого дисбаланса в микроэкологии кишечника недоношенных детей.

Ключевые слова: Бактериальная флора, фекалии, кишечник, новорожденные, количественное определение

ВВЕДЕНИЕ

В неонатальный период формирование нормальной комменсальной микрофлоры играет важную роль в развитии защиты слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.Сообщалось, что бактериальная флора недоношенных детей в отделении интенсивной терапии новорожденных (ОИТН) отличается от здоровых доношенных детей. [1,2] У здоровых желудочно-кишечный тракт доношенных новорожденных был колонизирован разнообразной микрофлорой. в течение 10 дней жизни, тогда как у недоношенных детей микрофлора не получает возможности для колонизации. У младенцев с низкой массой тела при рождении это важный фактор риска неонатальной смертности и заболеваемости, включая сепсис и желудочно-кишечные расстройства.[3,4] Большинство этих младенцев обычно получают лечение антибиотиками широкого спектра действия в условиях интенсивной терапии интенсивной терапии вскоре после рождения. Таким образом, бактериальная флора этих младенцев характеризуется отложенной колонизацией желудочно-кишечного тракта ограниченным количеством бактерий. [5] Однако имеется ограниченная литература, касающаяся микробной флоры у недоношенных детей, особенно у детей с низкой массой тела при рождении (<1500 г), которые предрасположены к различным инфекционным и желудочно-кишечным осложнениям, таким как некротический энтероколит (НЭК).Таким образом, это исследование было проведено с целью определения фекальной микрофлоры у недоношенных детей, поступивших в отделение интенсивной терапии стационара третичного уровня, чтобы оценить риск развития желудочно-кишечных осложнений у этих детей.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Проспективное исследование (Фаза-I) было проведено в двух группах во Всеиндийском институте медицинских наук, Нью-Дели, Индия, после того, как оно было одобрено с этической точки зрения. В группу А вошли шестьдесят два недоношенных ребенка с массой тела <1500 г и сроком беременности <34 недель.Из 62 случаев было проведено количественное определение 34 образцов стула и качественный анализ фекальной бактериальной флоры в 28. Образцы были собраны на 3, 7, 14, 21 день (все ± 2 дня) у 34 детей. В группе Б обследовано 29 доношенных новорожденных. Образцы кала были качественно проанализированы.

Один грамм образца стула переносили во флакон со стеклянными шариками (SIGMA Chemicals Co., США), содержащий 1 мл стерильного физиологического раствора, и встряхивали. Готовили десятикратные серийные разведения (10 ² -10 ⁹ ) и 10 мкл каждого разведения культивировали на 5% овечьей крови и агаре МакКонки (Difco Chemicals) для аэробных бактерий.Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 48 часов и исследовали через 24 часа и 48 часов. Бактерии были идентифицированы с помощью обычных биохимических тестов, а также с помощью системы API, то есть теста API 20 E, API staph / strep (bioMerieux Vitek Inc.) для различных грамположительных и отрицательных организмов. Для анаэробного культивирования образцы стула высевали на агар для инфузии сердца Brain (Hi-Media Laboratories, Pvt. Ltd. India) с добавлением гемина (Hi-Media Laboratories, Pvt. Ltd. India) и Vit K (Hi-Media Laboratories, Pvt.Ltd. India) и инкубировали в анаэробных условиях при 37 ° C в течение от 48 часов до 72 часов. Анаэробные бактерии были идентифицированы обычными биохимическими методами и системой RapID ANA (Innovative Diagnostic System Inc Norcross, GA).

Общее количество бактерий на грамм стула сообщалось в каждом образце количественного исследования.

Статистика

Подсчет колоний организмов выражали как log ₁₀ подсчет. Для статистических сравнений использовали средний логарифм КОЕ. Данные были проанализированы с помощью EPIINFO-Ver 6.04. Статистический метод для непрерывных переменных использовался с применением t-критерия или критерия Манна-Уитни (где применимо), а для категориальных переменных использовались хи-квадрат или точный критерий Фишера (для сравнения количества колонизированных младенцев). Значимость наблюдалась, если P <0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Всего в это исследование был включен 91 ребенок для определения структуры кишечной флоры новорожденных.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Общее количество колоний аэробных бактерий колебалось от 10 ⁴ до 10 ¹³ КОЕ / г.Показатели колонизации наиболее часто выделяемых бактерий приведены в. Характер колонизации изменялся через разные промежутки времени в конце сбора образцов (d21). Количество фекальных бактерий, как грамотрицательных, так и грамположительных, постепенно увеличивалось в течение 2–3 недель. Некоторые образцы нельзя было собрать в определенный промежуток времени, потому что у младенцев не было стула.

Таблица 1

Общее количество бактериальных изолятов у недоношенных детей (Группа A)

Колонизация грамотрицательных организмов увеличивалась с 1 по 21 день во время пребывания в отделении интенсивной терапии.Наблюдалось последовательное увеличение общего числа видов бактерий и значительные изменения в структуре колонизации отдельными видами бактерий с течением времени. К концу первого месяца жизни значительный процент детского стула был заселен Klebsiella pneumoniae ; 17,8% на 3 день, 50% на 7 день, 61% на 14 день, 60% на 21 день ( P <0,05) и E. coli ; 35% на 3-й день, 40% на 7-й день, 38% на 14-й день и 60% на 21-й день. Среднее log КОЕ грамотрицательных бактерий и грамположительных бактерий было статистически незначимым с 3-го по 14-й день ( P > 0). .05). На 21 день наблюдалось значительное изменение колонизации обоих бактериальных sp ( P <0,05) []. Salmonella senftenberg, Salmonella typhi, Salmonella gallinarum, Klebsiella oxytoca были обнаружены только у младенцев с клиническим анамнезом НЭК.

Таблица 2

Среднее значение log КОЕ у младенцев <1500 г

КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Колонизированными грамотрицательными и положительными аэробными организмами были Klebsiella pneumoniae 41,3%, Escherichia coli 24.1%, Proteus sp 10,3%, Enterococcus faecium 34,4%, Staphylococcus epidermidis 6,8% и Micrococcus sp 3,4% [] и колонизация анаэробных организмов составила Bifidobacterium sp (13,4%) и Clostridium biferment (3,4%). Наблюдалась статистически значимая разница в росте грамположительных организмов в обеих группах ( P <0,05), которая оказалась низкой у недоношенных детей. Рост защитных организмов (полезных бактерий) был статистически незначимым ( P > 0.05) в обеих группах.

Таблица 3

Общее количество видов бактерий у недоношенных и доношенных детей

ОБСУЖДЕНИЕ

Характер бактериальной колонизации в кишечнике новорожденных зависит от различных факторов; гестационный возраст, способ родоразрешения, тип кормления, бактериальные взаимодействия, антимикробная терапия и другие факторы окружающей среды. Сообщалось, что колонизация микрофлоры у детей, вскармливаемых грудью, отличается от кормления молочными смесями. [4,5] Некоторые авторы обнаружили, что фекальная микрофлора у детей, вскармливаемых грудью и детей, вскармливаемых смесью, по существу одинакова; другие показали, что Bifidobacteria являются преобладающей флорой в фекалиях младенцев, вскармливаемых грудью.[6,7] Эти исследования были сосредоточены на доношенных детях и показали, что желудочно-кишечный тракт здоровых доношенных новорожденных колонизирован различными типами аэробных и анаэробных микробных организмов. [8,9]

Iseki K изучал развитие фекальной флоры, как аэробные, так и анаэробные при введении различных кормовых смесей, и наблюдали, как в кишечнике новорожденных сначала колонизировались представители Enterobacteriaceae в первый день жизни, которое постепенно уменьшается на 6 ^{-й день} , за которым следует Bifidobacteria , которое увеличивалось через 2-3 дня после приема пищи. жизнь грудного вскармливания младенцев.Однако количество других бактерий (энтеробактерий) было больше у детей, вскармливаемых из бутылочки, чем у детей, вскармливаемых грудью. Эти результаты свидетельствуют о том, что грудное вскармливание защищает незрелый кишечник от системных инфекций. [10] Ира HG и др. . сообщили, что популяция грамположительных бактерий была выше, чем грамотрицательных бактерий у детей с низкой массой тела при рождении, а характер бактериальной колонизации был аналогичен как у детей, вскармливаемых грудным молоком, так и у детей, вскармливаемых молочной смесью, в условиях США. Они выделили Lactobacillus sp.и Bifidobacterium sp. только у одного младенца, находящегося на грудном вскармливании. [11] В другом исследовании было замечено, что представители Enterobacteriaceae, Enterococcus sp. и Staphylococcus sp. были колонизированы в течение 7 ^-го -го дня жизни без антибактериальной терапии доношенных новорожденных. В исследовании, проведенном Стивенсом Д.К. и сотрудниками, 20 младенцев, которых кормили молочными смесями из хранимых смесей и патентованными смесями на второй неделе жизни среди госпитализированных недоношенных детей, продемонстрировали картину кишечной флоры, отличную от нормальных доношенных детей, что может привести к внутрибольничному сепсису и увеличению заболеваемости системных и локализованных инфекций.Доказано, что использование замороженного грудного молока для подавления колиформных и других потенциально патогенных организмов неэффективно у этих госпитализированных недоношенных новорожденных, особенно тех, которые лечились антибиотиками широкого спектра действия. [12,13] Настоящее исследование было запланировано для определения различных аэробная и анаэробная фекальная бактериальная флора недоношенных детей (<1500 г) в условиях интенсивной терапии интенсивной терапии. В нашем исследовании большинство младенцев были колонизированы 2-3 видами бактерий в обеих группах, преобладающими видами были Klebsiella pneumoniae и E.coli . Уровень колонизации грамотрицательных бактерий был высоким как у недоношенных, так и у доношенных детей, тогда как количество грамположительных бактерий было меньше у недоношенных. Бактериальная колонизация недоношенного кишечника, вероятно, играет роль в патогенезе и предрасположенности к желудочно-кишечным осложнениям, таким как некротический энтероколит (НЭК). Вестра-Мейер и др. . исследовали аэробную и анаэробную фекальную флору при некротическом энтероколите новорожденных, чтобы установить связь между колонизацией конкретной бактериальной флорой и развитием NEC, и сообщили, что уровень выделения грамположительных кокков (GPC) был выше, чем грамотрицательных бацилл (GNB).Обычно выделяемыми аэробными бактериями были Staphylococcus epidermidis (61%), Enterococcus sp. (56%), Klebsiella sp. (37%) и E.coli (29%), а анаэробными организмами были Clostridium sp (61%) и Bacteroides sp (20%). В их исследовании аэробные и анаэробные виды бактерий колонизировали в среднем 2,1 и 0,8 на грамм стула соответственно. Они предположили, что не было значительной разницы в характере колонизации бактерий между исследуемой и контрольной группами.Важным отличием было то, что колонизация Klebsiella sp была выше у тех детей, у которых в анамнезе был диагностирован НЭК [14], тогда как в текущем исследовании Salmonella senftenberg, E.coli, Salmonella typhi, Salmonella gallinarum и Klebsiella oxytoca выращивали у детей с диагнозом NEC. Было высказано предположение, что патогенная кишечная флора может играть роль в предрасположенности новорожденных к внутрибольничному сепсису и НЭК [15,16] Hoy et al .сообщили, что снижение количества некоторых видов бактерий в фекальной флоре из-за изменения pH после бактериальной ферментации в тонком кишечнике изменяет внутрипросветные условия и предшествует клиническому началу НЭК [17].

Холл и др. . обнаружили дефицит Lactobacilli по сравнению с бактериями формы кишечной палочки у недоношенных детей, которые находились на лечении в отделении интенсивной терапии, и высокое количество Lactobacillus у доношенных детей к 30-дневному возрасту. Это исследование указывает на недостаток полезной флоры у недоношенных детей.[18] Аэробные и анаэробные виды бактерий у недоношенных новорожденных с НЭК или без них были колонизированы в среднем на 2,1 и 0,1 на грамм стула соответственно. В настоящем исследовании Lactobacillus sp. был выделен только в одном образце стула на 7-14 день, тогда как у доношенных новорожденных Bifidobacterium sp были выделены у 4/29 (13,7%), в отличие от Rubatelli et al . из Италии, который сообщил о высокой распространенности Bifidobacterium sp. (47,6%) у детей, вскармливаемых грудью, и Klessen et al .у 89% детей, вскармливаемых грудью, на 7 ^-й -й день жизни, которая увеличилась до 95% к 30 ^-й -й день, Lactobacilli были выделены в 12/19 (63%) проб стула на 7 ^{-й день.} дня и увеличилась до 80-85% в течение двух месяцев. [19,20] Однако удивительно, что в настоящем исследовании Lactobacilli не были выделены ни в одном образце стула грудных младенцев за период 1 -2 месяца. Также выделение Bifidobacterium sp.число доношенных детей было низким по сравнению с вышеупомянутым исследованием. В связи с нашим открытием, необходимо рассмотреть важный вопрос: лучше ли колонизируются дети, вскармливаемые грудью, анаэробами в нашей стране? Большинство недоношенных детей в отделении интенсивной терапии получали антибиотики широкого спектра действия и частично или полностью кормились сцеженным грудным молоком, что может быть фактором, ограничивающим бактериальную колонизацию в кишечнике. Необходимо изучить меры, которые «нормализуют» микробную экологию кишечника. У здоровых доношенных детей грудное молоко способствует колонизации Bifidobacterium и Lactobacillus sp.[21] Показания к грудному вскармливанию просто на основании того, что они помогают нормальному развитию кишечной флоры, для борьбы с кишечной инфекцией, должны быть пересмотрены. Циркулирующее микробное давление в окружающей среде в развивающихся странах, таких как Индия, может препятствовать колонизации анаэробными неспорообразующими грамположительными бациллами, такими как Bifidobacterium , а также Lactobacillus . В нашем предыдущем исследовании мы обнаружили умеренную степень колонизации Lactobacilli у более крупных недоношенных детей (> 1500 г), которых кормили пробиотиком Lactobacillus rahmnosus . ГГ .В последние годы несколько исследований, включая наше исследование, показали, что многие препараты Lactobacillus могут колонизировать кишечник недоношенных новорожденных и изменять кишечную флору, но приводит ли такая колонизация к клинически значимому улучшению, еще предстоит изучить [22, 23]

Представленные здесь данные основаны на микробиологической изоляции в обычных аэробных и анаэробных средах. Недавние отчеты предполагают, что молекулярные инструменты, основанные на сходстве последовательностей 16 S рДНК, такие как флуоресцентная гибридизация in-situ (FISH) и денатурирующий градиентный гель-электрофорез (DGGE), помогли преодолеть ограничения традиционных методов микробиологической культуры при изучении состава фекальной микрофлоры.Эти инструменты успешно применялись для изучения развития детской микрофлоры, изменений микрофлоры человека в процессе старения, воздействия пребиотиков и пробиотиков на состав микрофлоры человека, а также влияния диетических вмешательств на микрофлору кишечника [24]. ]

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Мы пришли к выводу, что специфическая микробная экология модели колонизации и отсутствие защитных грамположительных анаэробных бактерий, особенно Bifidobacterium sp. и Lactobacillus sp в незрелом кишечнике могут иметь решающее значение в патогенезе НЭК.Предполагается, что использование пробиотиков (препарат, содержащий Lactobacillus ) может иметь защитную роль у этих младенцев, чтобы предотвратить НЭК и другие желудочно-кишечные осложнения.

ПОДТВЕРЖДЕНИЕ

Эта работа была поддержана грантом Fogarty 1 RO3 TW 00601 от NIH, США. Мы хотели бы поблагодарить участвующую команду отделения педиатрии NICU, AIIMS за предоставленные кейсы.

Сноски

Источник поддержки: Fogarty Grant 1RO3 TW 00601 от NIH, США

Конфликт интересов: Не заявлено

ССЫЛКИ

Нозокомиальная колонизация недоношенных детей Klebsiella oxytoca: вероятная роль процедуры энтерального питания в передаче и борьбе со вспышкой с использованием перчаток

Задача: Изучить устойчивость колонизации недоношенных детей Klebsiella oxytoca, уделяя особое внимание способу передачи бактерии и оценке стандартных мер предосторожности для остановки эпидемии.

Дизайн: Ретроспективный анализ случаев и проспективное исследование систематических бактериологических образцов (стул и глотка) от младенцев, медицинских работников (МР) и окружающей среды с генотипированием штаммов с помощью произвольно запрограммированной полимеразной цепной реакции.

Параметр: Отделение недоношенных детей (PBU) и отделение интенсивной терапии новорожденных в университетской больнице Сент-Этьен, Франция.

Результаты: Вспышка K oxytoca подозревалась в двух педиатрических палатах после возникновения фатальной бактериемии у новорожденного, госпитализированного в PBU, и колонизации других младенцев через 2 месяца. Ретроспективный анализ показал, что у 24 детей пищеварительный тракт колонизирован. Резервуаров окружающей среды ни в отделениях, ни при энтеральном питании не наблюдалось. K окситока не была выделена из проб МО.Генотипирование подтвердило наличие эпидемических штаммов, хотя независимые клоны были ответственны за инфекции или колонизации в каждой из двух единиц. Хронология и место колонизации младенцев (выделение K oxytoca в стуле перед глоткой) были определены в ходе проспективного исследования и позволили предположить, что процедуры энтерального питания могут быть источником заражения. Поэтому медработники рекомендовали использовать перчатки во время этой практики и после корректировки стандартных мер предосторожности остановили вспышку.

Вывод: Чтобы предотвратить перекрестное заражение среди младенцев из группы высокого риска, необходимо уделять особое внимание стандартным мерам предосторожности. Бактериологический надзор за пищеварительным трактом новорожденных может помочь проверить соблюдение этих рекомендаций.

Klebsiella — обзор | Темы ScienceDirect

Клинические проявления

Klebsiella spp . являются важными условно-патогенными микроорганизмами у детей, вызывающими широкий спектр инфекций, включая ИБС, связанные со здоровьем и населением; инфекции центральной нервной системы (ЦНС), дыхательных путей, мочевыводящих путей, опорно-двигательного аппарата и брюшной полости; глубокие абсцессы и послеоперационные, травматические и ожоговые инфекции. Примерно 75% BSI связаны со здравоохранением. ^16–24 Вспышки в неонатальных отделениях вызывают серьезную озабоченность. ²⁵ Инфекции новорожденных включают BSI, менингит, абсцесс мозга, конъюнктивит, абсцесс печени, эндокардит, пневмонию, некротический фасциит, артрит, остеомиелит, инфекцию мочевыводящих путей (UTI) и некротический энтероколит (NEC). ^26–32 Клинические проявления инфекции не отличаются от таковых у других грамотрицательных бацилл. Хотя Escherichia coli является наиболее частой причиной ИМП, Klebsiella и Proteus spp . также являются распространенными микроорганизмами Enterobacteriaceae, связанными с ИМП. ³³

Грамотрицательные микроорганизмы составляют более 50% ИМТ у детей. Во время 6-летнего проспективного исследования грамотрицательных BSI в педиатрическом медицинском центре третичного уровня в Израиле, K.pneumoniae был наиболее часто идентифицируемым патогеном и составлял 26% (109 из 419) изолятов. ¹⁹ В обзоре 57 случаев ИМТ у детей, вызванного K. pneumoniae , 67% были моложе 12 месяцев, и у большинства было по крайней мере одно основное заболевание, включая аномалии желудочно-кишечного тракта в 56%, центральный венозный катетер. у 35%, нейтропения у 25% и патология мочевыводящих путей у 16%. ³⁴

Проект по надзору и контролю за патогенами эпидемиологической важности, основанный в Университете Содружества Вирджинии в Ричмонде, предоставил важные данные для выявления преобладающих патогенов, ответственных за связанные со здравоохранением ИБТ у детей. ³⁵ Хотя грамположительные организмы, особенно коагулазонегативные виды Staphylococcus spp., Составляли более 50% изолятов, Candida spp . На приходилось 9,3%, а на Klebsiella spp . На , Enterobacter spp. И Escherichia coli приходилось 5,8%, 5% и 5% изолятов соответственно.

Другие состояния, связанные с Klebsiella spp. BSI в детстве включает недоношенность, предшествующее воздействие антибиотиков, предшествующий ротавирусный гастроэнтерит, процедуру Касаи при атрезии желчных путей, злокачественные новообразования, послеоперационный статус, ожоги, множественные травмы, синдром приобретенного иммунодефицита, гранулоцитарные нарушения, гомозиготную серповидно-клеточную анемию, трансплантацию твердых органов, послеоперационный период после спленэктомии, системной красной волчанки и дефицита β1 цепи рецептора интерлейкина-12. ^19,35–41 Загрязненные растворы для внутривенного введения также были идентифицированы как источник Klebsiella spp. BSI. ⁴²

Общий уровень смертности для Klebsiella spp. BSI составляет примерно 11%, а уровень смертности от BSI, связанного со здравоохранением, составляет 14,5%. ^19,35 Повышенный уровень смертности в значительной степени связан с острым лейкозом, нейтропенией, инфекциями, связанными со здоровьем (HAI), и предшествующей терапией кортикостероидами.

Цитотоксин-продуцирующие штаммы K.oxytoca были причастны к антибиотико-ассоциированному геморрагическому колиту. ^14,43,44 Клиническим проявлениям боли в животе и кровавой диареи обычно предшествует лечение антибиотиками с β-лактамным агентом. Колит обычно сегментарный и локализуется преимущественно в правой ободочной кишке. Прекращение приема противомикробного агента и поддерживающая терапия обычно приводят к клиническому разрешению. Энтеротоксигенные и энтероагрегантные штаммы K. pneumoniae также были вовлечены в качестве причин детского гастроэнтерита. ⁴⁵

Raoultella spp. о них непостоянно сообщалось как о колонизирующих бактериях желудочно-кишечного тракта госпитализированных новорожденных и как возбудителях ИБС и пневмонии у взрослых. ^46,47 R. planticola был выделен из мочи взрослых; раны, включая внутрибрюшной абсцесс, связанный с панкреатитом; и зараженные смеси для младенцев. ^48–50 R. ornithinolytica был выделен из крови новорожденного с висцеральной гетеротаксией, функциональной аспленией и сложным врожденным пороком сердца, у которого была НЭК; от одного взрослого с гигантской кистой почек; а от другого — с синдромом, похожим на кишечную лихорадку. ^51–53

R. ornithinolytica и R. planticola , по-видимому, вызывают отравление скомброидных (гистаминовых) рыб. ⁸ Это состояние возникает после приема внутрь неправильно хранимой (> 20 ° C) скумброидной рыбы (например, тунца, махи-махи, скумбрии, скумбрии, сардины) и возникает в результате расщепления высоких концентраций гистидина на гистамин под действием бактериальных гистидиндекарбоксилаза.